偶氮染料是指染料分子结构中含有偶氮基（—N="N—）的染料，这类染料具有色谱齐全、颜色鲜艳、色牢度较高、成本低等优点，被广泛应用在纺织品印染行业。但相关研究表明，部分偶氮染料与人体作用后能够产生多种芳香胺类物质（如2—萘胺、联苯胺、2,4—二氨基甲苯等），经人体的活化作用后会使细胞的DNA结构和功能发生改变，从而诱发细胞癌变或畸变等病变，对人体具有致癌性。因此，欧盟在2003年9月11日公布的第2002 /61号令中规定：凡是在还原条件下释放出致癌芳香胺的偶氮染料都禁止使用。我国也将禁用偶氮染料的测试作为国家强制性标准GB 18401—2003《国家纺织产品基本安全技术规范》的重要检测项目，对于检测出禁用偶氮染料的纺织品，一律禁止生产和销售。

目前国际上明令禁止使用的芳香胺有24种，4–氨基偶氮苯（4–amino azo benzene，简称4–AAB）是其中的一种。GB/T17592—2006《纺织品禁用偶氮染料的测定》，是对除4–氨基偶氮苯以外的其余23种偶氮染料的检测方法标准。此方法标准是先将染料在酸性缓冲溶液中还原成芳香胺，然后检测芳香胺以测定禁用偶氮染料。而4—氨基偶氮苯在GB/T17592中的酸性条件下容易还原，会生成苯胺和对苯二胺，而苯胺和对苯二胺本身未被禁用，且是偶氮染料合成的基本成分，因此若检测出苯胺和对苯二胺，并不能说明使用了4–氨基偶氮苯染料。所以，4—氨基偶氮苯不能使用常规方法检测。GB/T23344—2009《纺织品4—氨基偶氮苯的测定》是在碱性环境下还原，此时，4—氨基偶氮苯染料未被分解，可以直接通过仪器测定。

本文初步探讨了碱性pH值对4—氨基偶氮苯的还原反应的影响，同时对纺织品中4—氨基偶氮苯的测定方法的线性范围、检出限、准确性、重复性等进行了相关研究。

1 实验部分

1.1 仪器设备与试剂

热电DSQⅡGC-MS，毛细管柱，TR-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 um；恒温水浴锅；振荡器；分析天平。

4-氨基偶氮苯标准品，固体粉末，纯度96.0%；蒽—d10标准品，固体粉末，纯度96.0%，均购自Dr. Ehrenstorfer GmnH。无水乙醚、正己烷，氢氧化钠、氯化钠、连二亚硫酸钠，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。所用水均为超纯水。

标准储备液：4—氨基偶氮苯标准储备液，1000 mg/L，溶解在叔丁基甲醚中；蒽—d10标准储备液，1000 mg/L，溶解在正己烷中。标准储备液保存在密封棕色样品瓶中放入冰箱-4℃冷冻保存，保质期三个月。

标准使用液：4—氨基偶氮苯标准使用液，100 mg/L，从标准储备液稀释所得，溶解在叔丁基甲醚中；蒽—d10，100 mg/L内标标准使用液，从标准储备液稀释所得，溶解在正己烷中。标准使用液保存在密封棕色样品瓶中放置冰箱冷藏，保质期一个月。

1.2 样品前处理

将纺织品样品剪碎至0.5 cm×0.5 cm以下，称取1.00 g样品于反应器中，加入9 mL20 g/L的氢氧化钠溶液，将反应器密闭，振摇使样品充分浸湿，然后加入1 mL的200 mg/mL的连二亚硫酸钠溶液，摇匀后于40℃恒温水浴中保温30 min。取出后，冷却至室温，然后加入10 mL无水乙醚、200 μL蒽—d10内标标准使用液、7 g氯化钠粉末，于振荡器剧烈振摇45 min，上层无水乙醚相供GC-MS仪器测试。

1.3 GC-MS仪器条件

色谱柱：毛细管柱，TR-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 um；载气：氦气，纯度≥99.999%，流速1 mL/min；进样口温度：280℃；传输线温度：250℃；检测器MSD温度：220℃；离子化方式：EI；离子化电压：70 eV。质量扫描方式：定性使用scan模式，扫描范围为50 μ～300μ，定量使用sim模式，监测离子为4氨基偶氮苯197μ，蒽—d10188μ。

柱温：50℃（0.5 min）, 25 ℃/min→280 ℃（5 min）。进样量：1μL。进样方式：分流，分流比10：1。

在此仪器条件下，4—氨基偶氮苯和内标蒽—d10混标溶液的总离子流图和质谱图如下：

图1  4—氨基偶氮苯和蒽—d10内标物的总离子流图

图2 4—氨基偶氮苯的质谱图

2 结果与讨论

2.1 pH值对4—氨基偶氮苯还原反应的影响

     配制pH值为11.7、12.7、13.7的氢氧化钠溶液，分别对4—氨基偶氮苯做空白加标试验，研究pH值对4—氨基偶氮苯回收率的影响，见图3。由图可知，碱性的强弱对4—氨基偶氮苯的还原反应有很大的影响，碱性越强，4—氨基偶氮苯就越不容易被还原分解，当pH值达到13.7（氢氧化钠的浓度为20 g/L）时，4—氨基偶氮苯的回收率达到76%，可以达到测试的要求。可见测试4—氨基偶氮苯的最佳pH值为13.7。

图3 pH值对4—氨基偶氮苯回收率的影响

2.2方法的线性范围

线性范围是指试样浓度与响应讯号之间保持线性关系的浓度范围。配制标准系列溶液，其中内标蒽—d10浓度均为2.0mg/L，4—氨基偶氮苯浓度分别为0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L、5.0 mg/L，标准溶液进行GC-MS分析，得到内标校正曲线。曲线的各标准点浓度回读值及曲线线性方程和线性相关系数见表1，曲线如图4。本次试验分别对3条内标校正曲线进行了方法线性的验证。

表1 4—氨基偶氮苯标准曲线线性方程、线性相关系数及标准溶液浓度回读结果

图4 标准曲线图

由R²及线性方程对标准溶液浓度的回读情况可认为此标准曲线线性良好，因此，4—氨基偶氮苯在0.5~5.0 mg/L 的范围内线性较好。

2.2 方法的准确性和重复性验证

方法准确性验证通过加标回收率体现。在待测样品中加入一定已知浓度的标准样品，混合均匀后，按照GB/T23344—2009方法进行前处理和仪器分析，计算回收率。回收率计算公式为：P = (加标试样测定值-试样测定值) /加标量×100 %，因为本试验选择的是阴性样品进行加标试验，故试样测定值为0，所以P ="加标试样测定值/加标量×100%。在本试验中，通过对阴性样品进行低、中、高3个浓度水平的加标试验计算回收率。试验结果见表2。

方法重复性验证是指在相同的测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。重复性的估算方法通过在同一实验室内，由同一实验人员用相同的实验设备至少做6次平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对标准偏差表示。本试验中在相同的检测条件下，称取1.0g阴性纺织品样品，分别进行低、中、高3个浓度水平的加标试验，每个水平进行6次平行试验，通过计算相对标准偏差RSD体现方法的重复性效果。试验结果见表2。

表2 4—氨基偶氮苯3个水平加标试验及6次平行测定的结果

由试验结果可见：在样品中添加水平分别为0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、5.0 mg/kg时，加标回收率值均在60%~90%之间，6次平行测定的平均加标回收率分别为：84.40%、71.06%、65.78%，均达到了GB/T23344—2009中对回收率60%~80%的要求。同时，3个加标水平6次平行测定的相对标准偏差RSD分别为3.60%、3.10%、5.69%，国标要求不大于10%即可，可见方法的重复性较好。

综上，方法的准确度和重复性均达到了检测方法要求。

2.3 方法的复现性

复现性是指在不同的测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。复现性的估算方法：在同一实验室内，由两个不同实验人员用相同的实验条件做平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对标准偏差表示。

在相同的检测条件下，由不同实验人员用同一实验设备对同一添加水平后的纺织品中4—氨基偶氮苯进行测定，分别做双样，试验结果如表3。

表3 复现性试验结果

    由试验结果可知，复现性的相对标准偏差为4.15%，复现性能满足检测的要求。

2.4 方法的检测限

通过对样品进行10次最低点加标试验，计算标准偏差，方法的检测限MDL以3倍标准偏差值表示，试验结果如表4。

表4方法的检测限

由试验结果得知，本方法的检测限MDL为0.39 mg/kg，进位取值0.5mg/kg。GB/T23344—2009中要求方法的检测限为5.0 mg/kg，可见本方法的检测限小于5.0 mg/kg，说明本方法达到了国标中对4—氨基偶氮苯的检测要求。

3 结论

试验结果显示：测试4—氨基偶氮苯的最佳pH值为13.7，氢氧化钠的浓度为20 g/L；4氨基偶氮苯在浓度为0.5～5.0 mg /L时，线性良好，相关系数达到0.996以上；方法的准确性验证试验中，样品加标回收率值在60%~90%之间，达到了GB/T23344—2009中对回收率至少在60%~80%的要求；方法重复性验证试验中，3个加标水平6次平行测定的相对标准偏差RSD分别为3.60%、3.10%、5.69%，可见方法的重复性较好；方法复现性验证试验中，相对标准偏差4.15%，复现性良好；本方法对4—氨基偶氮苯的检测限MDL为0.5mg/kg，达到了GB/T23344—2009中的检出限要求（5.0 mg/kg）。综上所述本实验方法能够满足GB/T23344—2009测试要求。

（ 邵玉婉 费国平 中国纤检）